实验研究
王加炜, 裘宇容, 周成林, 胡海, 李晓涛, 刘红军, 刘淑君
目的: 探究不同保存温度及高温灭活处理对在常用的 RNA 病毒样本保存液中保存效果的影响。方法: 以禽 IBV 冠状病毒（弱毒株）作为模型,采用等渗盐溶液 Hank's 液、胍盐保存液和市售商品化 CWY076 保存液保存禽 IBV 冠状病毒时,比较高温灭活过程对病毒核酸完整性和后续荧光定量 PCR 核酸检测的影响。结果: 保存在常用 Hank's 液中的样本,经 60 ℃ 灭活 30 min 后采用荧光定量 PCR 检测循环阈值（Ct值）显著增加（P<0.05）,且病毒检测灵敏度仅达到病毒原液的 10–6 稀释梯度;而保存在自配胍盐保存液中的样本在–80 ℃ 和 4 ℃ 下保存 7 d,60 ℃ 灭活 30 min 后,病毒检出率与检测灵敏度则无明显影响;但在 37 ℃ 保存 7 d 后,检测灵敏度降为 10–6 稀释梯度;保存在商品化 CWY076 保存液（康为世纪产品）中的样本,在–80 ℃、4 ℃ 和 37 ℃ 下保存 7 d 后,以及 60 ℃ 灭活 30 min,对病毒检出率与灵敏度均无明显影响,在 10–7 稀释梯度的检出率仍为 91.70%。结论: 采用 Hank's 保存液无法在灭活处理过程中有效保存 RNA 病毒样本,而在胍盐保存液和市售 CWY076 保存液中均能在 60 ℃ 灭活处理后有效保证后续荧光定量 PCR 核酸检测过程中病毒 RNA 核酸的检出率,其中在 CWY076 保存液中保存的效果优于其他保存液,即便在 37 ℃ 条件下保存 7 d 后,RNA 病毒仍保持很高的检出率和检测灵敏度。
